原发布者:Z12C21
DNA提取方法简介DNA提取的几种方法基因组DNA的提取CTAB法SDS法其它DNA提取的几种方法非基因组DNA的提取质粒DNA的提取•碱裂解法•煮沸法线粒体、叶绿体DNA的提取•差速离心结合SDS裂解法基因组DNA-CTAB法CTAB法原理(植物DNA提取经典方法)CTAB(hexadecyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜,并与核酸形成复合物。具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性,在这种条件下,蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里该复合物在高盐溶液中(>0.7mol/LNaCl)是可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。注:CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此在将其加入冰冷的基因组DNA-CTAB法CTAB提取缓冲液的经典配方组份终浓度Tris-HClEDTANaCl(pH8.0)(pH8.0)100mM20mM1.4MCTAB2%(W/V)β-巯基乙醇0.1%(V/V)使用前加入Tris-HCl(pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性;NaCl提供一个高盐环境,使DNP(脱氧核糖核蛋白)。CTAB溶解细胞膜,并结合核酸,使核酸便于分离;β-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA-CT